Exemples pràctics:  

      La pràctica és fonamental a l'hora de fer les nostres preparacions. Hem volgut donar una petita orientació detallada de les passes a fer amb aquests exemples.
  A la secció de tècniques, es poden trobar d'una forma més teòrica les principals tècniques en la confecció de les preparacions.
 

Observant in vivo:    
    Per observar petits organismes aquàtics, com per exemple algues o larves d'insectes, no cal fer una preparació i muntar-la.   Moltes vegades bastarà l'observació directa entre el cobreobjectes i el portaobjectes. A vegades ens caldrà colorar les mostres per tal d'augmentar-ne el contrast. Bastarà deixar caure una gota a la vora del cobreobjectes i esperar que es vagi difonent, filtrant baix la superfície del vidre.
    Un altre mètode pot esser el de mesclar abans la mostra i el colorant amb l'ansa de platí.

   Observem grans de pol·len:  
        Els estams de les plantes superiors contenen els sacs pol·línics on es formen els grans de pol.len.
       Per aquesta preparació hem depositat uns grans de pol·len a sobre del portaobjectes

  Per aconseguir millors resultats podem il·luminar els grans de pol·len amb llum superior (esquerra) o també utilitzar colorants per destacar algunes parts (dreta: pol·len de pi).

Observem els plasts (Cloroplasts amiloplasts):
Els plasts els podem trobar dins les cèl·lules i a vegades donen una coloració com és el cas dels cloroplasts (contenen clorofil·la i són de color verd, o en els cromoplasts que donen color a molt fruits.

  A l'esquerra un tall de fulla on es poden veure els cloroplasts (Color verd) i a la dreta grans de midó de patata. Per tal de veure millor l'estructura hem fet servir la llum polaritzada.

Observem els estomes:

     Si amb una llanceta llevem sa pelleta que recobreix una fulla podrem veure els estomes.

        Per observar mostres en viu a vegades ens convindrà utilitzar un portaobjectes amb excavació. L'excavació impedeix l'aixafament de la mostra i en facilita els moviments. La gota es diposita a sobre del cobreobjectes que, una vegada invertit, es dipositarà sobre un portaobjectes amb excavació. És aconsellable untar amb vaselina el contorn de l'excavació per tal d'evitar ràpides evaporacions, que no ens permetrien fer una observació detallada  de la mostra.

 Dissociar materials:  

       Dissociar consisteix a rompre un teixit mitjançant l'ajut d'agulles i llancetes.
       Per tal d'afavorir la dissociació, inclourem la mostra en una gota de líquid i procedirem a desfer el material.

 Talls: El micròtom:

        A vegades ens pot interessar un tall  molt fi on puguem veure una estructura delicada. El micròtom de mà és un aparell senzill, que permet subjectar la mostra prèviament inclosa en parafina o  un altre material que la sostingui i amb l'ajut d'un pern micromètric pujar aquesta mostra fent talls tan fins com ens sigui possible. Normalment utilitzam navalles molt afilades que, desplaçant-les sobre la platina, ens permeten realitzar talls més fins del que seria possible sense utilitzar aquest aparell.

   - Netejar bé el portaobjectes per tal d'evitar el greix que impediria que els talls s'hi aferrassin bé.
   - Posar al centre una petita quantitat d'albúmina de Mayer i  espargir-la  uniformement.
   - Posar aigua destil.lada sobre el portaobjectes. Els talls han de surar i  no han de tocar ni el vidre ni la parafina en cap punt.
   - Tallar el tros de parafina que volem traslladar al portaobjectes.
    - Dur els talls al portaobjectes.
   - Llevar l'aigua sobrant procurant que els talls quedin ben centrats.
   - Deixar assecar.

   D'aquesta manera aconseguirem que els  talls quedin ben aferrats al  portaobjectes. Així ja podem continuar amb el mètode de l'hematoxilina de Delafield.
   - Xilol per llevar la parafina
    - Alcohol de 70 a 80 per evitar el pas brusc a l'aigua
    - Aigua destil.lada per retirar l'alcohol  
   - Hematoxilina  
   - Rentar amb aigua utilitzant un flascó netejador.  
  - Eosina
  - Muntatge.

Un altre mètode consisteix en l'hematoxilina de Hendeniein
   - Xilol per retirar la parafina  
  - AA per llevar el xilol  
  - Alcohol de 70 a 80 per evitar un pas brusc a l'aigua.
  - Aigua destil.lada per llevar les restes d'alcohol.
  - Sulfat fèrric amoniacal al 4% (entre 2 i 12 hores)
   - Netejar amb aigua destil.lada
   - Hematoxilina de Heindenhein (d'1 a 24 hores)
   - Diferenciar. Consisteix a introduir les mostres en una càpsula de  petri amb una solució de sulfat fèrric amoniacal. Hem de anar mirant al  microscopi per tal de saber el punt exacte de decoloració.
  - Rentar amb un flascó netejador
  - Muntatge

Talls vegetals:  

        Seguirem pas rere pas el que cal fer per realitzar un tall vegetal.
        En aquesta imatge veim el material que utilitzarem així com diverses mostres de pecíols de fulles.

.     Observem l'estructura de la fulla:

       Per aquesta preparació utilitzarem el microtom a fi de fer un tall el més prim possible

Fixació:
Els materials recollits s´han de tractar amb productes que evitin la dregradació de les cèl·lules intentant que conservin la aparença de quan eren vives.

Per això caldrà:
     - Aturar l'activitat que produeix la destrucció dd les cèl·lules.
    - Evitar que les proteïnes puguin entrar o sortir de la cèl·lula.
    - Reforçar el teixit cel·lular per tal que aguanti el procés que durem a terme tant per fixar com per muntar la mostra.
    - Aconseguir que el teixint tingui una aparença mot semblat a la que tenia quan era viu.
El producte utilitzat és el formol. Es tracta d'un líquid molt volàtil que necessariament hem de manipular amb precaució. Si no disposem de una campana extractora caldrà fer-ho en un lloc ben ventilat intentant repirar el menys possible els seus vapors. 

Deshidratació:
Els materials han de passar per alchohol de diferent concentració.
Convé disposar de dos recipients que continguin cada concentració. Començarem amb un recipient que tingui  alcohol de 70% per passar després al de 96% i finalment al de 100%.

Depenent de la gruixa de la mostra deixarem més o mems temps la mostra dins cada concentració. Per exemple 4 hores. No convé deixar massa temps en el de 100% ja que es podrien endurir massa. (2-3 hores màxim).

Ara en el procés de diafaniçació (els materiaals es fan més translúcids) el passarem al xilol. i el deixarem durant uns minuts.
Si la mostra no es fa transparent es possible que el procés de deshidratació hagi deixat aigua.

He comprat un litre de formol i un de xilol. Els guard en un lloc ventilat i lluny del lloc de treballl.

Inclusió en parafina:
Escalfarem la parafina fins a uns 60º. A continuació hi posem lña nostra mostra i la deixem entre unes 12 a 24 hores
Si volem podem fer un canví de parafina a la meitat del temps.
Per fer es taco de mostra es important orientar sa mostra en la direcció en la que volem fer els talls.
Ara ho deixem refredar i a continuació hem de fer es talls amb el microtom. Quan més fins millor.

El muntatge:
  Muntatge en gelatina glicerinada:
      En aquest vídeo podeu veure pas a pas una manera senzilla que no necessita deshidratar el talls.
      El muntatge passats uns mesos es va deteriorant.

  Muntatge en Bàlsam del Canadà
Per poder incluir el talls en parafina es necessari deshidratar el lmaterial deixant-lo en alcohol amb una gradació de concentracions creixents. Després el posarem en xilol.

Ara mantindrem el el material dins la parafina en estat líquid 60º aproximadament durant unes 24 horres.
A continuació i amb un microtom farem els talls lo més fins posssibles.
Les mostres es poden ara incloure en la resina.

Deixarem un petit pes a sobre el cobre objectes i esperarem a que es solidifiqui. Amb un bisturí podem retrirar amb molt de compte la resina que ha sortit del cobreobjectes i que ara està solidificada.

 Aquest producte cada vegada es més dificil de trobar i a més el preu sol ser bastant elevat. Al mercat podrem trobar resiunes sintètiques que substiyueixen perfectament el Bàlsam del Canadà; fins i tot són més transparents i poden durar mes temps abans de sofrir un deterior.

Vaig comprar 26 Ml d'Entellan i eles resultats han estat del tot satisfactoris. Ara caldrà esperar un grapats d'anys per saber si realment funciona com ho ha de fer.

Les mostres han d'estar completament deshidratades es tracta d'un polímer format per acrilats mixtes y disolt en tolue. És per això que es pot fer servir amb preparacions tractades amb xilen just abans de fer el muntatge.
Índix de refracció (20°C) 1,492 - 1,500
Densitat (20°C/4°C) 0,925 - 0,935 g/cm3
Viscositat (20°C) 60 - 100 mPa*s
Fluorescència < 100 ppb

Fotografia microscòpica:  

       Per tal d'obtenir imatges amb microscopi basta disposar d'una màquina  reflex  un microscopi i un adaptador  si bé cal dir que l'adaptador no és imprescindible. Si alineam el microscopi amb la càmera i tapam amb paper metal.litzat la zona d'unió ens pot fer el mateix  servei.
   Per fer les fotografies llevarem prèviament l'objectiu a la càmera.

Fotografia amb una reflex digital.        He acoplat la Canon 500D amb el microscopi. Utlitzant un adaptadot T2 (Canon EOS) i un reductor de tub a la mida del microscopi.                L'ocular del microscopi és un 5X.

Aquestes fotografies s´han fet en el mode manual i una sensibilitat de 100 ISO. L'obturació oscila segons la mostra i la posició del concentrador entre 1/2 i 2 segons